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La ciprofloxacine a diminué la charge virale de polyome BK chez les patients ayant subi une greffe allogénique de cellules souches hématopoïétiques

L’objectif de cette étude était de tester si la ciprofloxacine à dose standard pourrait supprimer la réactivation de l’infection à BKV au cours de HSCTMethods Soixante-huit patients ont reçu la ciprofloxacine ou une céphalosporine comme antibioprophylaxie après la transplantation de cellules souches hématopoïétiques. Les études de laboratoire comprenaient la quantification de la charge de BKV et les niveaux de ciprofloxacine urinaire et la sensibilité in vitro aux médicaments de BKV. Vingt-deux patients ont reçu de la ciprofloxacine, ont reçu des céphalosporines, ont reçu des corticostéroïdes et des antibiotiques reçus. ciprofloxacine, et reçu céphalosporines, et reçu interrompu traitement ciprofloxacine Ciprofloxacin bénéficiaires ont développé une charge de BKV pic significativement plus faible, par rapport aux bénéficiaires céphalosporine médiane, × copies / mL vs × copies / mL; P =, indépendamment de l’administration concomitante de corticostéroïdes Moins de receveurs de ciprofloxacine que de receveurs de céphalosporines P = développé BKV viruria avec une augmentation de B-log de la charge de BKV pendant HSCT, qui a été associée à significativement plus de cas de cystite hémorragique des patients avec une augmentation maximale de ⩾ log vs des patients sans augmentation maximale de ce niveau; P & lt; Les patients traités par la ciprofloxacine ont excrété la ciprofloxacine dans l’urine à un taux moyen de μg / mL, – μg / mL, comparable à la concentration inhibitrice in vitro de – μg / mL de ciprofloxacine trouvée pour des isolats de BKV. Ciprofloxacine a diminué la réactivation urinaire du BKV après HSCT

Poly virus BK BKV infecte>% des adultes , restant latent dans les voies urinaires Réactivation asymptomatique de l’infection avec excrétion urinaire peut survenir chez les individus immunocompétents Pendant immunosuppression, BKV peut être pathogène Chez les patients qui subissent des cellules souches hématopoïétiques Transplantation HSCT, BKV est liée à la cystite hémorragique Chez les patients qui subissent une transplantation rénale, la réactivation de l’infection BKV entraîne une néphropathie associée au BKV La cystite hémorragique survient chez% -% des patients après HSCT Cystite hémorragique La cystite hémorragique est généralement bénigne, mais les cas postengraftment sont plus sévères Auparavant, nous avons établi une relation quantitative entre la virémie BKV et la cystite hémorragique après HSCT De plus, une virémie significative BKV est invariablement survenue chez les patients avec une cystite hémorragique sévère, suggérant que c’était une condition préalable. De plus, les taux de BKV viruria En effet, les antibiotiques quinolones inhibent la réplication du BKV Ces observations nous ont conduit à tester l’efficacité de la ciprofloxacine, qui était parmi les antibiotiques utilisés pour la prophylaxie de routine. pendant la TCSH, en réduisant le taux de réactivation de l’infection à BKV L’objectif principal était la suppression de la virémie BKV L’objectif secondaire était une diminution du taux de cystite hémorragique sévère

Patients et méthodes

Patients et protocoles HSCT Des patients consécutifs ayant subi une greffe allogénique myéloablative à l’hôpital Queen Mary, Hong Kong, ont été étudiés. Des protocoles HSCT ont été décrits ailleurs [,,,] La cystite hémorragique était définie comme une hématurie douloureuse non due à une infection ou une hémorragie hémorragique. De la période de conditionnement au lendemain de la GCSH, les patients ont reçu soit mg par voie orale continue ou par voie intraveineuse mg ciprofloxacine ou céftibutène orale mg qd ou intraveineuse céphalosporine ou imipénème Le protocole a été administré par voie orale. approuvé par le comité d’examen institutionnel de l’hôpital Queen MaryChantillonnage d’échantillons urinaires Vingt-quatre heures d’échantillons d’urine ont été prélevés avant le conditionnement, le jour de la perfusion médullaire, et chaque semaine par la suite jusqu’au jour où l’échantillon A a été aliquoté et centrifugé à a été extrait de μL d’urine libre par le QIAamp Blood Minikit Qiagen et élué avec μL de tampon Quantification du taux de ciprofloxacine urinaire par chromatographie liquide à haute performance HPLC Deux cents microlitres d’urine ont été mélangés avec μL d’acide pipémidique standard interne à μg / mL; Les échantillons ont été mélangés au vortex avec de l’acétonitrile BDH et centrifugés. Vingt microlitres du surnageant ont été injectés dans le système HPLC Agilent. Des étalons d’urine Agilent Technologies contenant de la ciprofloxacine, – μg / mL, ont été préparés en ajoutant des solutions de ciprofloxacine standard à des aliquotes d’urine sans médicament. PCR quantitative en temps réel pour la BKV PCR quantitative en temps réel Q-PCR a été réalisée avec ABI Prism Sequence Detector PE Biosystèmes Les séquences des amorces Q-PCR et la sonde TaqMan ciblant le gène BKV VP, les protocoles d’amplification et l’assurance qualité ont été rapportés ailleurs [ ] Inhibition de la réplication BKV in vitro Trente et un échantillons d’urine obtenus au moment de la charge maximale de BKV de patients ayant subi une greffe de CSH ont été utilisés dans l’étude. Deux cents microlitres d’urine ont été inoculés dans une lignée embryonnaire de fibroblastes pulmonaires HEL et incubés jusqu’à cytopathie. effets ont eu lieu ou pendant des jours Dans ce dernier cas, les cellules ont été en outre passés de sorte que l’effet cytopathique Les résultats des isolats réussis ont été confirmés par PCR L’activité anti-BKV de la ciprofloxacine a été testée à des concentrations de,, et μg / mL. Les activités anti-BKV du foscarnet à des concentrations de,, et μg / mL, cidofovir à, et μg / mL, lévofloxacine à, et μg / mL, et novobiocine à, et μg / mL ont également été testés. Le test d’inhibition a été réalisé dans une plaque de microtitration contenant des cellules HEL Un mélange de mL contenant ou TCID TCID est équivalent à la dilution virale la plus élevée qui a conduit à des effets cytopathogènes en% des cellules de BKV et différentes concentrations de médicaments ont été préparées et inoculées dans des puits en double. les mélanges de médicaments ont ensuite été retirés et remplacés par ml de milieu de culture après jours. La moitié du milieu dans chaque puits a été changée chaque semaine. Les concentrations qui inhibaient BKV à des dilutions de TCID ont été définies comme les concentrations qui empêchaient la cytopathie. fectures dans les cellules HEL à la dose virale testée Pour l’assurance qualité, les dilutions de et TCID ont été dosées en TCID pour démontrer les effets cytopathogènes en% des cellules Analyse statistique Les résultats ont été exprimés en valeurs médianes, sauf indication contraire. réalisée avec le test Pearson and et des données numériques avec le test U de Mann-Whitney et le logiciel SPSS de test t de Student, version; Valeurs SPSS P de & lt; ont été considérés comme statistiquement significatifs

Résultats

Patients et traitement antibiotique Soixante-huit patients ayant subi une greffe de CSH ont été recrutés de manière prospective, et recrutés rétrospectivement tableaux – Vingt-deux patients traités par ciprofloxacine Quatorze patients traités par ceftibuten Sept patients ont reçu la ciprofloxacine initialement, mais leurs schémas thérapeutiques ont été modifiés ultérieurement. céphalosporine et / ou imipénème Ces patients constituaient le groupe non -iprofloxacine. Douze patients recevant de la ciprofloxacine et des receveurs de ceftibutène ont reçu des corticostéroïdes pour une réaction du greffon contre l’hôte [GVHD; patients], en traitement de conditionnement [patient], ou pour le traitement des éruptions cutanées [patient] Le traitement par Ciprofloxacine a été interrompu pour les patients, et les données concernant ces patients ont été exclues de l’analyse de l’effet de la ciprofloxacine sur BKV viruria. caractéristiques cliniques entre les groupes de patients P & gt; , par χ table d’essai

Tableau View largeTélécharger les caractéristiques démographiques et cliniques des patients qui ont subi une greffe de cellules souches hématopoïétiques HSCT, par régime de traitementTable View largeTélécharger les diapositives Caractéristiques démographiques et cliniques des patients qui ont subi une greffe de cellules souches hématopoïétiques HSCT, par régime de traitement

Tableau View largeTélécharger les lamesCliniques et virologiques des patients sans pic significatif BK virus BKV charge au cours de la greffe de cellules souches hématopoïétiques HSCTTable View largeTélécharger les lamesLes caractéristiques cliniques et virologiques des patients sans pic significatif BK virus Charge BKV au cours de la greffe de cellules souches hématopoïétiques Soixante-cinq pour cent des patients avaient une virémie BKV quantifiable, avec des échantillons dosés en triple. La charge maximale de BKV variait de × copies du génome / ml à × copies du génome / ml Deux profils de virémie BKV ont été observés et des augmentations impliquées de la charge BKV et un pic significatif défini comme une augmentation de ⩾ log, survenant à une médiane de jours après la gamme HSCT, – jours après le tableau HSCT et le schéma A Le deuxième schéma a eu lieu chez les patients qui avaient BKV quantifiable mais fluctuant charges non associées à une table de pointe significative et figure B ; un sous-groupe de patients dans cette catégorie avait une diminution de la charge de BKV figure B La charge maximale de BKV a différé les patients avec une augmentation de ⩾-log, × copies / mL; les patients avec une augmentation de & lt; -log, × copies / mL; P & lt; En outre, les charges moyennes de BKV différaient également significativement entre la deuxième et la septième semaine après la HSCT. Sept patients avaient des profils indéterminés de virurie sans viruria quantifiable, patients; augmentations progressives à faible niveau de la charge virale, patients; échantillons d’urine incomplets collectés, patients Ces groupes n’ont pas différé en ce qui concerne les paramètres clinicopathologiques P & gt; , par χ table d’essai

Tableau View largeDownload slide Caractéristiques cliniques et virologiques des patients ayant eu des charges de BKV de BKV significatives après une greffe de cellules souches hématopoïétiques HSCTTable View largeTélécharger les lamesCartes cliniques et virologiques des patients ayant eu des charges de BKV de BK significatives après une greffe de cellules souches hématopoïétiques.

Figure Vue large Diapositive Diagrammes récurrents du virus BK BKV viruria chez des patients après une greffe de cellules souches hématopoïétiques HSCT A, Profil de pic significatif dans la charge BKV Augmentation de ⩾-log pour un patient typique avec ce modèle Un tel pic est survenu chez les patients B, Profil des fluctuations de Niveau de BKV chez un patient typique sans pic significatif, c.-à-d. Une augmentation du nombre de patients Ces courbes ont été observées chez les patients présentant un profil de patients ayant le plus haut taux de BKV à l’admission, avec une diminution progressive de la charge BKV HSCT A, profil de culminant significatif dans la charge de BKV ⩾-log augmentation pour un patient typique avec ce modèle Un tel pic est survenu chez les patients ayant subi une greffe de cellules souches hématopoïétiques. patients B, Profil des fluctuations du taux de BKV chez un patient typique sans petit pois Ces fluctuations sont survenues chez les patients Inscrits, Profil des patients avec ce profil de pic qui présentaient la charge de BKV la plus élevée à l’admission, avec une diminution progressive de la charge de BKV pendant la TCSH Tous ces patients ont reçu de la ciprofloxacine

Figure View largeTélécharger slideMean BK virus BKV charge pendant la greffe de cellules souches hématopoïétiques HSCT pour les patients avec diamant et sans carrés augmentations significatives de la charge BKV Chaque point représente la charge moyenne BKV pour l’ensemble de la cohorte la barre d’erreur dénote SEM Chez certains patients, la collecte d’urine les échantillons ont été prolongés jusqu’au jour après la GCSH Il n’y avait pas de différence significative P = non significatif [NS] avant le conditionnement et à quelques jours et après la HSCT Cependant, une différence significative de la charge BKV s’est produite entre la deuxième et la septième semaine. ; ** P & lt; ; *** P & lt; Figure View largeTélécharger slideMean BK virus BKV charge pendant la greffe de cellules souches hématopoïétiques HSCT pour les patients avec diamant et sans carrés augmentations significatives de la charge BKV Chaque point représente la charge moyenne BKV pour l’ensemble de la cohorte la barre d’erreur dénote SEM Chez certains patients, la collecte d’urine les échantillons ont été prolongés jusqu’au jour après la GCSH Il n’y avait pas de différence significative P = non significatif [NS] avant le conditionnement et à quelques jours et après la HSCT Cependant, une différence significative de la charge BKV s’est produite entre la deuxième et la septième semaine. ; ** P & lt; ; *** P & lt;

Tableau View largeTélécharger les caractéristiques démographiques et cliniques et le développement de la cystite hémorragique sévère chez les patients qui ont subi une greffe de cellules souches hématopoïétiques HSCT et manifesté différents modèles de polyome Virus BK BKV viruriaTable View largeTélécharger les caractéristiques démographiques et cliniques de et le développement de la cystite hémorragique sévère chez les patients qui ont subi transplantation de cellules souches hématopoïétiques HSCT et différents profils de polyome BK virus BKV viruriaBKV viruria et le risque de cystite hémorragique sévère Huit patients ont développé une cystite hémorragique sévère, qui ont tous eu une augmentation de la charge BKV de ⩾ log, par rapport à aucun des patients sans augmentation significative de la charge de BKV de vs de; P & lt; , par χ table de test Avec l’utilisation de ⩾-log augmente la charge de BKV, la sensibilité et la spécificité de cystite hémorragique sévère ont été déterminées pour être respectivement% et%, tandis que les valeurs prédictives positives et négatives étaient respectivement% et% avec une cystite hémorragique sévère, le pic de charge de BKV a précédé l’apparition de la cystite hémorragique, le temps médian à l’apparition de la cystite hémorragique, jours; Les taux urinaires de ciprofloxacine ont été mesurés chez les patients recevant de la ciprofloxacine avec une augmentation de ⩾-log de la charge de BKV et avec une augmentation du nombre de & -log Tous les échantillons avaient des niveaux mesurables de ciprofloxacine médiane, μg / mL; Les receveurs de céphalosporine avec une augmentation de ⩾-log de la charge de BKV et avec une augmentation de & llog ;, ont eu des niveaux négligeables de ciprofloxacine médiane, μg / ml; Les patients ayant reçu des agents autres que la ciprofloxacine n’ont pas été testés. Chez les patients traités par antibiotiques autres que la ciprofloxacine × copies / mL vs × copies / mL; P = chiffre Lorsque ces patients ont été analysés en même temps que ceux recevant une corticothérapie concomitante, la charge maximale de BKV médiane était encore plus faible dans le groupe ciprofloxacine que dans le groupe noniprofloxacine × copies / mL vs × copies / mL; P = En outre, significativement moins de patients atteints de ciprofloxacine ont développé une augmentation ⩾-log de la charge BKV que les receveurs d’autres agents que la ciprofloxacine P = tableau Finalement, tous les patients avec une diminution constante de la charge BKV B ont reçu la ciprofloxacine. la survenue d’une cystite hémorragique sévère n’a pas différé entre les groupes ciprofloxacine et nonciprofloxacine

Les patients recevant la ciprofloxacine Cip avaient une barre de charge médiane BKV significativement plus faible que ceux qui ont reçu des antibiotiques autres que la ciprofloxacine. Ce point n’a pas été affecté par le corticostéroïde. Les patients recevant différents antibiotiques représentaient la charge la plus élevée de BKV chez un patient lors d’une greffe de cellules souches hématopoïétiques. Les patients recevant de la ciprofloxacine Cip présentaient une BKV médiane significativement plus faible. barre de charge que ceux qui ont reçu des antibiotiques autres que la ciprofloxacine Non-Cip Ce modèle n’a apparemment pas été affecté par corticoïdes traitement stéroïde

Diapositive entre les schémas antibiotiques reçus, le niveau de polyome virus BK BKV viruria, et l’apparition de cystite hémorragique sévère HCTable View largeTéléchargement slideRelationship entre les régimes antibiotiques reçus, niveau de polyome virus BK BKV viruria, et l’apparition de la cystite hémorragique sévère HCInhibition de la réplication BKV Pour la TCID de BKV, le cidofovir à des concentrations de & gt; – μg / mL a systématiquement inhibé tous les isolats cliniques et la souche standard BKV VR-Foscarnet a été inefficace contre la TCID de BKV, mais à une concentration de μg / mL, elle inhibait la TCID de BKV dans l’isolat clinique et la lévofloxacine de la souche VR à une concentration de μg / mL inhibait la TCID de BKV des isolats cliniques, mais à μg / mL, elle inhibait la TCID de BKV dans tous les cas. isolats cliniques et la souche VR- D’autre part, la novobiocine à une concentration de μg / mL inhibe la TCID de BKV isolats cliniques Pour la TCID de BKV, la ciprofloxacine inhibée des isolats cliniques à des concentrations de μg / mL pour les isolats et de μg / mL pour les isolats Quatre isolats de BKV étaient résistants à la ciprofloxacine, dont les isolats et dans le tableau provenaient de receveurs de ciprofloxacine avec une augmentation de ⩾-log dans le patient BKV et, respectivement, dans le tableau Tous les patients avec des isolats de BKV résistants à la ciprofloxacine présentaient une augmentation significative de la charge de BKV Seul le patient développait une cystite hémorragique, mais ce patient recevait du ceftibuten Pour les autres patients sans cystite hémorragique, le traitement était la ciprofloxacine , ceftibuten, et un corticostéroïde ou ciprofloxacine Pour la TCID de BKV, la ciprofloxacine n’a montré aucun effet inhibiteur

Les effets inhibiteurs de la novobiocine, de la lévofloxacine, de la ciprofloxacine, du foscarnet et du cidofovir sur la réplication du virus BK BKV dans les cellules HELTable View largeTélécharger les effets inhibiteurs de la novobiocine, de la lévofloxacine, de la ciprofloxacine, du foscarnet et du cidofovir sur la réplication BKV du virus BK dans les cellules HEL

Discussion

Nous avons montré que la cystite hémorragique sévère était limitée aux patients avec un pic ⩾-log dans la charge de BKV. De plus, la charge maximale de BKV précédait invariablement l’apparition de la cystite hémorragique, ce qui implique que l’inhibition du BKV pourrait prévenir la cystite hémorragique après HSCTWeWe a montré que la ciprofloxacine Des concentrations de – μg / mL ont inhibé certains isolats de BKV. Les patients prenant de la ciprofloxacine présentaient des concentrations urinaires moyennes de – μg / mL, ce qui était proche du niveau de μg / mL rapporté après la prise d’une dose orale de mg La ciprofloxacine à dose standard a atteint des niveaux urinaires adéquats pour l’inhibition de la réplication du BKV. Ces observations ont été confirmées cliniquement. La ciprofloxacine a diminué le taux de réactivation de l’infection à BKV après la TCSH, comme le montre la diminution du nombre de pics ⩾ log in la charge de BKV et les niveaux de pointe médians inférieurs de BKV En outre, un modèle de diminutions stables dans le BKV lo La ciprofloxacine n’a pas empêché la réactivation de l’infection par BKV chez tous les patients. Un facteur contributif pourrait être la BKV résistante à la ciprofloxacine. Au moins, le receveur de ciprofloxacine a été infecté par une souche de BKV résistante à la ciprofloxacine, avec une augmentation significative correspondante de la Chez les autres patients infectés par le BKV résistant à la ciprofloxacine, le ceftibuten a développé une cystite hémorragique sévère et recevait un corticostéroïde ou de la ciprofloxacine. L’étiologie de la cystite hémorragique est multifactorielle La GVH aiguë est un facteur de risque important [,,] Adénovirus [Important], aucun des patients sans pic significatif de la charge de BKV dans cette étude n’a développé de cystite hémorragique sévère. Ces résultats suggèrent fortement que la réactivation de l’infection BKV , entre autres poss Sur la base de ces résultats, nous proposons une pathogenèse provisoire de la cystite hémorragique sévère post-HSCT. Lors du conditionnement, une chimiorradiation intensive endommage l’épithélium urinaire, conduisant à la régénération cellulaire. Ceci fournit un microenvironnement permissif, car la cystite hémorragique La prolifération des cellules hôtes est nécessaire pour la réplication du BKV En outre, l’utilisation du traitement immunosuppresseur réduit le niveau d’immunosurveillance du BKV, permettant la réplication cytopathique à l’intérieur de l’épithélium urinaire. Après greffe hématopoïétique, les lymphocytes du donneur suscitent une réaction immunologique contre les antigènes viraux. l’épithélium urinaire, causant ainsi d’importantes hémorragies des muqueuses caractéristiques d’une cystite hémorragique sévère. Des études supplémentaires seront nécessaires pour valider cette hypothèse. Enfin, nous avons démontré que la ciprofloxacine à dose standard entraînait l’inhibition de la réplication urinaire du BKV. l’idofovir, la ciprofloxacine est relativement faible pour inhiber le BKV. Par conséquent, la ciprofloxacine pourrait être plus efficace si elle est utilisée comme prophylaxie après une HSCT, lorsque la charge de BKV est faible, peut-être avant le conditionnement pour la HSCT. Aucun des patients qui prenaient de la ciprofloxacine de cystite hémorragique développée par BKV, un effet bénéfique direct de l’utilisation de la ciprofloxacine sur la cystite hémorragique n’a pas pu être démontré, en raison du nombre relativement faible de patients ayant développé une cystite hémorragique sévère dans le groupe ciprofloxacine et des patients dans le groupe ceftibuten. les résultats in vitro suggèrent que la lévofloxacine peut être plus efficace que la ciprofloxacine, et les études cliniques de son utilisation sont justifiées

Remerciements

Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits