Menu

Japan Week Spokane

Relation Entre La Concentration Interleukine-Plasma Chez Les Patients Sepsis, Phénotype Monocyte, Propriétés Phagocytaires Monocytaires Et La Production De Cytokines

Phénotype des monocytes, leur capacité phagocytaire ainsi que la production de cytokines chez les patients atteints de septicémie avec de faibles concentrations d’interleukine-IL-sérum & lt; pg / mL et les patients atteints de septicémie avec des concentrations plasmatiques élevées en IL-pg / mL ont été étudiés dans les heures qui ont rempli les critères de septicémie. Les monocytes des patients avec des taux élevés d’IL ont des taux plus élevés d’antigène leucocytaire humain HLA-DR, HLA-ABC, CD, et CD, et la production de facteur de nécrose tumorale-α TNF-α et IL-, ainsi que la capacité des monocytes à phagocyter, était significativement élevée De patients avec des niveaux élevés de IL- plasma, les patients sont morts En revanche, tous les patients ayant une faible concentration plasmatique d’IL ont survécu jusqu’au jour. Les patients décédés avaient des concentrations d’IL élevées constantes pendant les premiers jours, alors que les taux d’IL chez les patients survivants diminuaient de%. Nos données indiquent que les taux d’IL sont un meilleur paramètre pronostique phase de septicémie que l’expression HLA-DR des monocytes

Le choc septique est la cause de décès la plus fréquente dans les unités de soins intensifs. En dépit des soins intensifs modernes et des traitements antibiotiques, la mortalité due au sepsis est élevée, allant de% -% chez les patients sans choc et ⩽% chez les patients septiques Lorsque l’infection locale se développe en une infection systémique et que des signes de septicémie sont apparents, une forte réaction systémique se produit et les cytokines, qui sont normalement limitées à des zones de lésion locale, peuvent être détectées par le système immunitaire dans la pathogenèse de la maladie septique. contribuant de manière systémique aux symptômes du choc septique Une de ces cytokines, la TNF-α cachectine, est considérée comme un médiateur central de la régulation immunitaire et des modifications physiopathologiques associées à la bactériémie et au syndrome septique Autres cytokines, comme l’IL- synergiquement avec TNF-α, stimulant la libération de médiateurs tels que IL-, IL-, IL-, IL-, et facteur de croissance transformant-β TGF-β, qui participent à l’infla hôte réponse tumorale et la pathogenèse de la septicémie et du choc septique Les concentrations plasmatiques de TNF-α ont été augmentées chez les patients présentant à la fois une maladie infectieuse Gram négatif et Gram positif La surproduction de TNF-α et, en particulier, de IL- ont été mis en corrélation avec de mauvais résultats chez les patients atteints de sepsis sévère et de choc septique TNF-α, IL-, et IL- sont des exemples typiques de cytokines multifonctionnelles Ils sont principalement produits par des monocytes activés Les lymphocytes T et B, les neutrophiles, les éosinophiles, les cellules tueuses naturelles, les mastocytes, les basophiles, les cellules endothéliales, les fibroblastes, les kératinocytes et les astrocytes sont également une source de cytokines . Les monocytes et les macrophages jouent un rôle important. rôle central dans l’immunité spécifique et non spécifique contre les infections bactériennes, virales et fongiques Les monocytes expriment un large éventail de marqueurs de surface, tels que les récepteurs Fc pour IgG FcγR et les récepteurs du complément CR, qui sont très En outre, les monocytes de personnes en bonne santé expriment également des niveaux élevés de molécules majeures du complexe MHC de classe II d’histocompatibilité, qui jouent un rôle crucial dans la présentation de l’antigène Ag aux lymphocytes T helper D’autres études ont montré que les changements dans l’expression de MHC classe II Ag sur les monocytes sont révélateurs d’infections en développement après chirurgie majeure et que les taux de mortalité et de guérison chez les patients infectés et septicémiques sont liés aux taux d’antigène leucocytaire humain HLA-DR , désactivation monocytaire, et IL- et TGF-β produits de manière endogène En outre, la prostaglandine E et l’adénosine monophosphate cyclique contribuent à ce phénomène, à la fois directement et indirectement, par IL- induction Récemment, il a été montré que l’utilisation d’IFN-γ le traitement des patients atteints de septicémie restauré réduit l’expression de HLA-DR sur les monocytes et les patients sauvés de sepsis sévère [,,] Dans cette étude, nous investiga Nous avons également évalué la production in vitro de cytokines et le phénotype des monocytes, ainsi que leurs propriétés phagocytaires. et nous avons étudié si ces paramètres sont des marqueurs pronostiques importants

Matériaux et méthodes

Les patients hospitalisés présentant un diagnostic de septicémie sur la base de critères initialement proposés par Bone et al étaient éligibles à l’étude. En outre, tous les patients devaient satisfaire à tous les critères de septicémie suivants: preuve à l’appui d’une origine infectieuse ou du diagnostic présomptif de syndrome septique; hyperthermie température corporelle ⩾ ° C ou hypothermie température du corps ⩽ ° C mesurée comme température centrale; tachycardie, définie comme une fréquence cardiaque de ⩾ battements / min en l’absence de récepteur bloquant les récepteurs β-adrénergiques; tachypnée, définie comme une fréquence respiratoire de ⩾ respirations / min ou la nécessité d’une ventilation mécanique; et une hypotension, définie comme une pression artérielle systolique de ⩽ mm Hg ou une baisse soutenue de la pression artérielle systolique de ⩾ mm Hg en présence d’un déficit liquidien adéquat. La toxicité systémique ou la perfusion Érythrée: acidose métabolique, hypoxie artérielle, insuffisance rénale aiguë, anomalie de la coagulation, diminution inexpliquée de la numération plaquettaire et détérioration aiguë de l’état mental du patient. Des échantillons de sang ont été prélevés dans des tubes Vacutainer Becton Dickinson, San José, CA contenant de l’EDTA et centrifugés. La concentration en IL a été déterminée semi-quantitativement au moyen d’un test de chevet développé par Knoll AG Ludwigshafen, Allemagne. Ce test permet l’identification rapide de IL- avec une sensibilité seuil de IL-, pg / mL. anticorps monoclonal anti-IL-souris MAb couplé à du latex bleu, μg d’anti-IL-MAb de souris, μg d’IL- recombinante humaine, μg d’un anticorps anti-ILLE nt MAb, et mg de composants tampons Il a été réalisé dans des conditions de routine d’unité de soins intensifs, et les résultats ont été obtenus chez min Dix patients avec IL-levels & lt; pg / mL ont été considérés comme négatifs par ce test, alors que les patients ont montré des taux d’IL ⩾ pg / mL En plus du test semi-quantitatif IL-, l’IL-, IL- et TNF-α ont été mesurés par ELISA Medgenix, Fleurus, Belgique Dans des essais indépendants, le sang a été aspiré dans des tubes Vacutainer contenant de l’EDTA et centrifugé immédiatement à g à ° C pendant min. Le sérum a été séparé et les aliquotes ont été congelées à-° C jusqu’à analyse. TNF-α, IL-, et IL- ont été analysés au départ. En outre, IL- a été mesuré à,, et h après la ligne de base.Les échantillons de sang pour l’étude ont été prélevés au départ de tous les patients et analysés par immunofluorescence et cytométrie en flux. On a incubé 1 ul de sang total avec du MAb pendant min à température ambiante dans l’obscurité. Chaque sonde, à l’exception du témoin isotypique, a été triple colorée avec l’anticorps monoclonal anti-CD et anti-HLA-DR. Ensuite, les globules rouges ont été lysés; Les leucocytes ont été stabilisés et fixés par Multi-Q-Prep Coulter, Hialeah, FL Enfin, les cellules ont été lavées fois et ont été immédiatement analysées par cytométrie en flux sur un Epter XL-MCL Coulter, comme décrit ailleurs Les MAb suivants ont été utilisés: anti- HLA-DR phycoérythrine [PE] -conjugué; Becton Dickinson, anti-CD PE / Cy-, anti-CR / CD, anti-CR / CDb, anti-ICAM- / CD, anti-transferrine / CD, et anti-CD conjugué à l’isothiocyanate de fluorescéine [FITC]; Immunotech, Marseille, France; anti-FcyRI / CD FITC; Medarex, West Lebanon, NH; et anti-HLA-ABC FITC; Cymbus Bioscience, Southampton, Royaume-Uni Les monocytes ont été comptés et les cellules CD ont été comptées Les données ont été exprimées en pourcentage et en fluorescence moyenne des canaux MCFPhagocytose a été déterminée à partir de μL de sang total héparinisé et IgG-opsonized et FITC-conjugué Phagotest; Orpegen, Heidelberg, Allemagne, qui a été incubé pendant min à ° C Les cellules ont ensuite été refroidies sur de la glace pour arrêter l’activité phagocytaire leucocytes ont été en outre colorées avec un anti-CD MAb Mon, PE pour détecter les monocytes Enfin, les cellules ont été lavées fois, et le pourcentage et la MCF des cellules phagocytaires CD ont été déterminées par analyse de cytométrie en flux Les données ont été analysées statistiquement pour chaque groupe et chaque point de temps. La comparaison entre les groupes a été effectuée au moyen d’un test t apparié. Les interactions entre les effets et les temps de groupe ont également été déterminées. Pour les comparaisons multiples, les ajustements selon Tukey-Kramer ont été effectués. Les valeurs de probabilité ont été calculées, et P & lt; a été considéré comme statistiquement significatif Nous avons utilisé SPSS, version G SPSS, Chicago

Résultats

Les caractéristiques démographiques et les caractéristiques cliniques des patients recrutés sont représentées dans le tableau. La concentration en IL a été mesurée dans le plasma des patients atteints de septicémie. Ces patients ont été répartis en groupes: patients à faible concentration plasmatique IL-, & lt; pg / ml; test au chevet IL- négatif et patients avec une concentration plasmatique élevée IL-, ⩾ pg / mL; un test positif au lit de l’IL, appelé IL- faible et IL- élevé, respectivement. Il n’y avait pas de différences significatives entre les groupes en ce qui concerne l’âge moyen, le sexe, le poids corporel et l’APACHE II. Score de physiologie aiguë simplifiée de SAPS Dans les membres du groupe à faible IL-, tous les patients étaient vivants après jours, comparés aux patients du groupe IL- élevé. Comme le montre le tableau, les patients avec des concentrations élevées de IL- ont montré des leucocytes significativement plus faibles. comptages de thrombocytes par rapport aux patients du groupe à faible IL- Il n’y avait pas de différences significatives dans les numérations de globules rouges, ainsi que dans les taux d’hématocrite et d’hémoglobine

Tableau Caractéristiques démographiques des patients présentant des taux plasmatiques bas et élevés d’interleukine IL- Caractéristique IL faible = élevée IL- n = âge, moyenne y ± ± sexe, homme / femme / / poids, moyenne kg ± ± Diagnostic d’admission à unité de soins intensifs Après chirurgie élective Après chirurgie d’urgence Non opératoire Score APACHE II ± ± SAPS ± ± Vivant le jour Caractéristique Faible IL- n = élevé IL- n = Âge, moyen y ± ± Sexe, mâle / femelle / / Poids, moyenne kg ± ± Diagnostic d’admission en unité de soins intensifs Après chirurgie élective Après chirurgie d’urgence Non peropératoire Score APACHE II ± ± SAPS ± ± Vivant le jour REMARQUE Les patients du groupe IL- inférieur avaient des taux d’IL- de & lt; pg / mL Les patients du groupe IL- élevé présentaient des taux d’APACHE ≥ ≥ pg / mL, une physiologie aiguë et une évaluation de la santé chronique; SAPS, score de physiologie aiguë simplifiéeView Large

Tableau Nombre de globules sanguins différentiels et paramètres hématologiques des patients présentant des taux plasmatiques bas et élevés d’interleukine- IL- Paramètre hématologique Patients ayant des taux d’IL- faibles n = Patients ayant des taux élevés d’IL- n = Leucocytes, cellules / μL ± ± a Thrombocytes, cellules / μL ± RBC, cellules / μL ± ± Hématocrite,% ± ± Hémoglobine, g / dL ± ± Paramètres hématologiques Patients ayant un faible taux d’IL- n = Patients ayant un taux élevé d’IL- n = Leucocytes, cellules / μL ± ± un thrombocytes , cellules / μL ± RBC, cellules / μL ± ± Hématocrite,% ± ± Hémoglobine, g / dL ± ± NOTE Les données mesurées au départ sont présentées en moyenne ± écart-type du nombre de patients. – les niveaux de & lt; pg / mL Les patients du groupe IL- élevé présentaient des taux d’IL-of pg / mLaStatistique statistique entre les groupes: P & lt; View LargeLes concentrations initiales d’IL-, IL- et TNF-α étaient significativement élevées chez les patients ayant un taux d’IL élevé. Les membres de ce groupe qui ne sont pas décédés présentaient une réduction de% des taux d’IL- par rapport aux niveaux de base, au cours des jours après que les patients ont rempli les critères de septicémie En revanche, la production d’IL chez les patients décédés est restée à des niveaux élevés pendant ce laps de temps

Tableau Production d’interleukine-IL-, interleukine-IL-, et facteur de nécrose tumorale-α TNF-α par des cellules mononucléées du sang périphérique de patients présentant des taux plasmatiques bas et élevés d’IL- Cytokine, pg / mL Patients ayant un faible taux d’IL- = Patients avec des niveaux élevés d’IL- n = IL- ±, ±, un IL- ± ± TNF-α ± ± un Cytokine, pg / mL Patients avec un faible taux d’IL- n = Patients avec des niveaux d’IL- élevés n = IL- ±, ±, un IL- ± ± b TNF-α ± ± a NOTE Les données mesurées au départ sont présentées en tant que moyenne ± écart-type du nombre de patients. Les patients du groupe à faible IL- avaient des niveaux d’IL- de & lt; pg / mL Les patients du groupe IL- élevé présentaient des taux d’IL ≥ ≥ pg / mLa Importance statistique entre les groupes: P & lt; bStatistique statistique entre les groupes: P & lt; Voir grand

Tableau Modifications de la production d’interleukine-IL chez les patients ayant des taux d’IL élevés à différents moments Durée, h Patients ayant survécu n = Patients décédés n = ± ± ± ± ± ± ± ± ± Temps, h Patients ayant survécu n = Patients décédés n = ± ± ± ± ± ± ± ± ± REMARQUE La valeur de référence de l’IL- pour chaque patient ayant des taux d’IL élevés ≥ pg / mL a été fixée à%, et les changements par rapport aux valeurs de base ont été calculés en IL. – pourcentage de production ± écart-type entre les patients ayant vécu et les patients décédés était statistiquement significatif P & lt; View Large L’expression de la surface cellulaire Ag a été étudiée au départ Comme indiqué dans le tableau, le pourcentage de cellules CD monocytaires portant HLA-DR ainsi que la densité de HLA-DR étaient significativement élevés dans le groupe IL- élevé, comparé au faible IL. – groupe En outre, l’expression du récepteur CD / FcγRI, CD / transferrine et HLA-ABC était également significativement régulée à la hausse dans le groupe IL- élevé, comme le montre une augmentation de MCF, alors qu’il n’y avait pas de différence significative dans l’expression de CR / CD, CR / CDb, ICAM- / CD et CD entre les membres de la table des deux groupes

Tableau Expression du marqueur de surface cellulaire sur les monocytes CD Low IL- High IL- Antigène% MCF% MCF HLA-DR ± ± ± a ± b HLA-ABC ± ± ± un CD / FcγRI ± ± ± un CD / CR ± ± ± ± CDb / CR ± ± ± CD / ICAM ± ± ± CD ± ± CD ± ± ± CD ± ± CD ± CD ± ± CD ± CD ± CD ± CDA ± CDA ± ± ± ± un CD / FcγRI ± ± ± un CD / CR ± ± ± CDb / CR ± ± ± ± CD / ICAM ± ± ± ± CD ± ± ± un CD ± ± ± NOTE Les données sont moyennes ± pourcentage de SD des monocytes CD et de l’intensité du MCF Les patients dans le groupe IL- bas avaient des niveaux d’IL- de & lt; pg / mL Les patients du groupe IL- élevé présentaient des taux d’IL-IL de ≥ pg / mL HLA, antigène leucocytaire humain; MCF, canal moyen fluorescenceaStatistiquement significatif entre les groupes P & lt; bStatistiquement significatif entre les groupes P & lt; View large Les monocytes des patients du groupe IL élevé présentaient un pourcentage significativement plus élevé de cellules CD phagocytantes E coli ainsi qu’un nombre significativement plus élevé de particules ingérées par cellule, comme indiqué par le MCF

Figure Vue largeDownload slideOn a incubé une centaine de microlitres de sang total et d’Escherichia coli conjugués à l’isothiocyanate de fluorescéine opsonisée aux Ig et au complément pour min à ° C. Ensuite, les cellules ont été refroidies sur glace pour arrêter l’activité phagocytaire. anticorps monoclonal My, phycoérythrine pour détecter les monocytes Enfin, les cellules ont été lavées fois, et le pourcentage A et l’intensité moyenne de fluorescence des canaux MCF; B des cellules phagocytaires CD ont été déterminées par analyse de cellules-trieuses activées par fluorescence * statistiquement significative entre les groupes P & lt; Figure Vue largeDownload slideOn a incubé une centaine de microlitres de sang total et d’Escherichia coli conjugués à l’isothiocyanate de fluorescéine opsonisée aux Ig et au complément pour min à ° C. Ensuite, les cellules ont été refroidies sur glace pour arrêter l’activité phagocytaire. anticorps monoclonal My, phycoérythrine pour détecter les monocytes Enfin, les cellules ont été lavées fois, et le pourcentage A et l’intensité moyenne de fluorescence des canaux MCF; B des cellules phagocytaires CD ont été déterminées par analyse de cellules-trieuses activées par fluorescence * statistiquement significative entre les groupes P & lt;

Discussion

et DP du complexe CMH de classe II et HLA-ABC du complexe CMH de classe I sont essentiels dans la présentation de l’Ag traité aux cellules T CD et CD, respectivement Monocytes expriment constitutivement FcγRI / CD, FcγRII / CD et CR CDb / CD Ces structures de surface cellulaire sont importantes dans la reconnaissance et l’internalisation des particules opsonisées D’autres molécules, telles que FcγRIII / CD et transferrine / CD, sont faiblement exprimées sur les monocytes sanguins au repos. Le résultat le plus frappant de notre étude est La base des taux d’IL a également des taux significativement différents de TNF-α, IL- et HLA-DR Cette constatation est en accord avec les résultats d’autres études dans la mesure où le taux de mortalité des patients atteints de septicémie est associé à des taux d’IL élevés [, ,] D’intérêt, l’expression de HLA-DR était plus faible chez les membres du groupe IL- faible, ce qui ne correspond pas aux études antérieures indiquant que l’expression HLA-DR & prédictive de la mort Nous et d’autres avons démontré que HLA-DR expre La ssion sur les monocytes est diminuée pendant la période chirurgicale Cependant, après une chirurgie répétée, comme pour les patients atteints de pancréatite aiguë, le stress chirurgical répété n’a pas d’influence supplémentaire sur l’expression HLA-DR L’expression de HLA-DR est principalement régulée par les cytokines Plusieurs chercheurs ont démontré que l’utilisation de l’IFN-γ pour le traitement des patients atteints de sepsis conduit à la délivrance d’un sepsis sévère et à l’amélioration de l’expression HLA-DR [,,] que l’expression de HLA-DR et de FcγRI / CD, ainsi que la capacité des monocytes à phagocyter les E. coli Ig-opsonisés, sont augmentées par l’IL- et le TNF-α L’étude actuelle semble confirmer ces résultats in vitro, parce que les patients ayant des taux élevés d’IL- et de TNF-α ont une expression HLA-DR élevée et une capacité phagocytaire des monocytes supérieure, comparativement aux patients avec de faibles taux d’IL- Cependant, en tenant compte du fait que les niveaux d’IL- discriminent d entre une septicémie sévère et une sepsie légère, une réduction plus forte de HLA-DR aurait été attendue chez les membres du groupe IL- élevé plutôt que chez les membres du groupe IL- bas. Bien que les patients que nous avons étudiés aient été recrutés dans l’étude après l’accomplissement des critères de la septicémie, une explication possible de ces résultats contradictoires est que, chez les patients ayant de faibles taux d’IL-, une immunosuppression progressive a déjà eu lieu. On sait que l’évolution de la septicémie sévère est au moins biphasique dans les premières heures après l’infection microbienne. colonisation, une réponse inflammatoire exagérée est détectée dans laquelle les cytokines pro-inflammatoires sont sécrétées de manière excessive. En particulier, l’IL- est rapidement augmentée lors de la stimulation des lipopolysaccharides, avec un pic maximum après -h. La phase du système immunitaire est alors suivie d’une immunosuppression progressive avec une réduction continue de HLA-DR dans les monocytes Ces patients présentaient une lipopolysacie constitutive et ex vivo réduite la production de cytokines induite par un aride; En particulier, la production de TNF-α a été dramatiquement réprimée Dans notre étude, les patients présentant des taux plasmatiques réduits d’IL-, IL- et TNF-α, associés à une réduction de l’expression HLA-DR et de la capacité phagocytaire des monocytes, sont une transition de l’hyperactivité à la suppression du système immunitaire Des niveaux élevés de IL- se sont avérés être le meilleur prédicteur unique de la mortalité chez les patients atteints de septicémie Analyse des données IL-, qui ont été recueillies avec le nouveau test IL- Les résultats semi-quantitatifs autorisés en min, indiquent que la mortalité des membres du groupe IL- élevé était considérable en% par rapport à celle du groupe IL- faible. Chez les patients qui ont survécu, la concentration d’IL- diminuait régulièrement, et le jour, ils atteignaient% réduction À l’opposé, les patients décédés n’ont pas montré de changements marqués dans la concentration d’IL- durant les premiers jours. Cependant, les scores APACHE II et SAPS n’étaient pas significativement différents de ceux obtenus En conclusion, l’analyse de nos données montre que les patients avec des niveaux élevés de IL-of pg / mL et des IL- et TNF-α améliorés les concentrations ont encore un système immunitaire activé, comme indiqué par une production élevée de cytokines pro-inflammatoires et une expression accrue de HLA-DR, FcγRI / CD et CD sur les monocytes ainsi qu’une augmentation de leurs propriétés phagocytaires, en comparaison avec les patients avec faible IL-. Ces données in vivo sont en accord avec les résultats in vitro antérieurs, montrant une relation étroite entre l’expression IL- et TNF-α et le phénotype monocytaire Nos études soulignent en outre que IL- est un marqueur pronostique fiable chez les patients atteints de sepsis sévère et suggèrent que notre test semi-quantitatif au chevet IL-, qui peut être facilement et rapidement effectué, peut être utile dans le dépistage et la surveillance des patients atteints de sepsis