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L’influence Du Polymorphisme De Promoteur Du Facteur-α Et Interleukine Gène Tumeur Nécrotique Sur La Réponse Inflammatoire Dans L’endotoxémie Humaine Expérimentale

Dans cette étude, nous montrons qu’il n’y a pas de corrélation entre le polymorphisme du promoteur du gène du facteur de nécrose tumorale α à la position, le polymorphisme du promoteur du gène de l’interleukine à la position et les niveaux de cytokine qu’ils produisent dans le modèle endotoxémique humain.

Il existe une influence génétique sur la réponse inflammatoire chez l’homme Des découvertes récentes de variation génétique ont fourni un aperçu de la susceptibilité et des résultats d’un large éventail de maladies L’importance des variations génétiques chez les patients septiques reste incertaineLe polymorphisme du gène TNF-α en position – , qui est dans la région promotrice de ce gène, situé sur le chromosome, a été associée à l’issue de maladies infectieuses. L’allèle TNF plus commun a un résidu de guanine G, alors que l’allèle TNF moins commun a une adénine A à la position – In Des études in vitro avec des monocytes du sang périphérique humain ont démontré que l’allèle TNF, homozygote ou hétérozygote, est associé à une production plus élevée de TNF-α après stimulation par l’endotoxine Dans la méningococcie infantile, les enfants hétérozygotes présentent un risque relatif de décès plus élevé que chez les enfants homozygotes pour l’allèle TNF De plus, une augmentation de l’allèle TNF a été Par comparaison avec des donneurs de sang sains et non apparentés , ce qui suggère que la mortalité et la morbidité peuvent être augmentées chez les grands producteurs de TNF-α. En revanche, dans une étude sur les parents au premier degré de patients atteints de méningococcie, Le polymorphisme du TNF n’était pas associé au résultat ou à la production de TNF, alors que les familles dont la faible production de TNF était fréquente présentaient un risque multiplié d’issue fatale. De plus, aucune corrélation n’a été mise en évidence entre l’allèle et le TNF chez les adultes. Une explication pourrait être que la période d’incubation de la stimulation ex vivo avec l’endotoxine pourrait avoir influencé la production de TNF-α . a suggéré que, chez les patients atteints de septicémie, la variation du moment de l’échantillonnage était responsable du biais de délai IL- le polymorphisme du promoteur du gène à la position – n’a pas été analysé chez les patients Les données cliniques sur la relation entre la réponse IL et le polymorphisme du gène IL sont contradictoires La plupart des rapports ont indiqué que la mutation G → A à – était associée à un faible niveau de production de IL , alors que Une étude a rapporté le contraire La cytokine anti-inflammatoire IL- pourrait jouer un rôle important dans les résultats cliniques de certains groupes de patients. Des taux d’IL élevés sont associés à une mortalité plus élevée chez les patients atteints de maladies infectieuses L’administration d’endotoxine iv est un Procédure unique et sûre pour l’évaluation de la physiopathologie de l’inflammation et de la septicémie chez des volontaires humains sains et pour éviter les biais de délai Nous avons évalué l’influence du polymorphisme du promoteur du gène TNF et IL- sur la réponse inflammatoire dans l’endotoxémie humaine expérimentale.

Patients et méthodes

Patients Douze sujets masculins en bonne santé, âge moyen ans, ont participé à cette étude Les antécédents médicaux et les examens physiques, hématologiques et biochimiques étaient sans particularité pour tous les sujets. Un cathéter artériel radial a été placé pour l’échantillonnage sanguin; la fréquence cardiaque et la pression artérielle ont été surveillées en permanence Au moment de l’exposition, l’endotoxine Escherichia coli, lot EC-; La pharmacopée américaine a été administrée à une dose de ng / kg de poids corporel, les unités d’endotoxine par μg en perfusion -min. Le sang pour l’investigation génétique a été prélevé une fois et le sang pour la détermination des cytokines a été prélevé avant la dose. ,,,,, et h après perfusion d’endotoxine, via un cathéter à demeure Les derniers échantillons ont été placés immédiatement sur de la glace, centrifugés g pendant min à ° C, et conservés à – ° C jusqu’au dosage. Les concentrations plasmatiques de TNF-α et IL- ont été déterminées par l’utilisation de kits MEDGENIX EASIA BioSource Europe SA Isolement d’ADN et polymorphisme du promoteur du gène IL- et TNF-α L’ADN a été isolé à partir d’échantillons sanguins veineux périphériques en utilisant un QIAamp Blood Kit Qiagen Pour le promoteur IL- génotypage, réactions PCR L’une a détecté l’allèle -G et l’autre détecté l’allèle -G De même, une réaction de PCR a été réalisée pour détecter l’allèle-TNF -G, et une autre a été réalisée pour détecter l’allèle TNF -A Des amorces d’hormone de croissance humaine ont été incluses dans tout r Les amorces spécifiques de IL ont produit un produit de bp, et les amorces de TNF ont produit un produit PCR de bp. Les réactions PCR ont été réalisées en utilisant des tubes à paroi mince dans un volume de réaction total de μL dans un système PCR GeneAmp Perkin-Elmer. Le mélange réactionnel complet est constitué de% de glycérol Merck, pg / pl de rouge de crésol Sigma Aldrich Chemicals; des désoxyribonucléoside triphosphates, pM chaque Boehringer Mannheim; Un tampon de PCR qui comprenait mM de MgCl Perkin-Elmer; des amorces spécifiques à μM chacune et des amorces de contrôle interne à μM chacune; U d’AmpliTaq Perkin-Elmer; et ng ADN génomique Le profil PCR comprenait une étape de dénaturation min à ° C, des cycles de PCR à deux températures dénaturation, s à ° C, et recuit et extension, s à ° C, et des cycles de PCR à trois températures dénaturation, s à ° C; recuit, s à ° C; Les produits de PCR ont été séparés par électrophorèse sur un gel d’agarose% et visualisés par coloration au bromure d’éthidium. Analyses statistiques Toutes les données sont exprimées en moyenne ± SEM Le test U de Mann-Whitney a été utilisé pour comparer les niveaux de cytokines de différents groupes. entre les paramètres a été analysé par le test de corrélation de rang de Spearman A -tailed P value & lt; a été considéré comme statistiquement significatif

Résultats

Polymorphisme du promoteur du gène TNF et réponse TNF-α Les volontaires homozygotes du TNF ont montré des concentrations plasmatiques maximales de TNF de ± pg / mL, et les pics de TNF plasmatique étaient de ± pg / mL chez les volontaires porteurs de l’allèle TNF homozygote. la différence a été trouvée P =

Figure Vue largeTélécharger la lameCours des taux plasmatiques de TNF-α en -h période après perfusion d’endotoxine, liés au polymorphisme du promoteur du gène TNFFigure View largeDownload slideCours des taux plasmatiques de TNF-α en -h période après perfusion d’endotoxine, liés au promoteur du gène TNF polymorphismeIL- polymorphisme du promoteur du gène – et réponse IL- Quatre volontaires homozygotes pour G ont démontré des niveaux maximaux d’IL- de ± pg / mL Cinq volontaires hétérozygotes présentaient des niveaux plasmatiques d’IL- de ± pg / mL, et des volontaires homozygotes pour A avaient des niveaux d’IL- de ± pg / mL Aucune différence significative n’a été observée entre ces groupes

Figure Vue largeDownload slideCourse de IL- niveaux plasmatiques dans une période -h après infusion d’endotoxine, liée au polymorphisme du promoteur du gène IL-, adénine; G, guanineFigure View largeTélécharger la lameCours des taux plasmatiques d’IL- dans une période -h après perfusion d’endotoxine, liés au polymorphisme du promoteur du gène IL-, adénine; G, polymorphisme du promoteur du gène guanineTNF et réponse IL- Six volontaires homozygotes pour le TNF présentaient les plus faibles concentrations plasmatiques maximales d’IL ± pg / mL Cinq sujets hétérozygotes présentaient des taux plasmatiques d’IL plus élevés ± pg / mL et un porteur homozygote de TNF les plus hauts niveaux plasmatiques d’IL- pg / mL Le polymorphisme du promoteur du gène du TNF était corrélé avec la réponse IL = r = P = Une tendance non significative était observée dans les rapports individuels d’IL- à TNF-α r =, P =

Figure Vue largeTélécharger la lameCours des niveaux plasmatiques d’IL- dans une période -h après la perfusion d’endotoxine, liés au polymorphisme du promoteur du gène TNFFigure Voir grandTélécharger la lameCours des taux plasmatiques d’IL- dans une période -h après la perfusion d’endotoxine, liés au polymorphisme du promoteur du gène TNF

Discussion

Nos résultats montrent que le polymorphisme de la région promotrice du TNF-α à – ne conduit pas à une différence cliniquement significative des taux de TNF-α dans l’endotoxémie humaine expérimentale. Nos résultats peuvent expliquer les résultats non concluants des études cliniques Une autre explication doit être recherchée Pour la relation entre TNF et l’incidence et la sévérité de la septicémie Une explication pourrait être le lien d’autres gènes désavantageux sur le même chromosome. Les gènes de TNF-α et TNF-β lymphotoxine-α sont disposés en tandem dans une région -kb dans le complexe majeur d’histocompatibilité MHC La localisation du TNF au sein du CMH a suscité beaucoup de spéculations sur le rôle des gènes du TNF dans l’étiologie des maladies liées au CMH, en particulier celles avec un composant inflammatoire ou auto-immun Nous avons également montré que le polymorphisme du promoteur en position – n’est pas corrélé avec les concentrations de IL- dans le plasma après provocation par l’endotoxine Bien que les nombres soient petits, l’absence d’une relation linéaire entre n le nombre d’allèles à forte production et de production d’IL rend peu probable qu’une augmentation du nombre de sujets entraîne la découverte d’une relation cliniquement significative. Le fait que nous n’ayons pas trouvé d’association significative entre le polymorphisme du promoteur du gène IL- et IL- En outre, nous avons démontré que les taux plasmatiques d’IL- étaient associés au polymorphisme du promoteur du gène du TNF. Les taux les plus élevés d’IL- ont été observés chez les sujets porteurs de l’allèle du TNF. explication de la mortalité liée au TNF Un ratio élevé de IL- à TNF-α, un profil de cytokine anti-inflammatoire, est associé à une issue fatale chez les patients fébriles Bien que nous ayons échoué à démontrer une corrélation significative entre ce rapport et le polymorphisme =, probablement en raison de la petite taille de l’échantillon, une tendance non significative a été montrée Les auteurs concluent que les polymorphismes des promoteurs des gènes TNF-α et IL- ne conduisent pas à une altération des produits géniques respectifs. L’influence du génotype sur le résultat de la septicémie, qui est évidente, est beaucoup plus compliquée. Le modèle d’endotoxémie à un seul contact chez des volontaires sains peut aider à expliquer pourquoi les données rapportées dans les études cliniques de cette relation sont contradictoires