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Le tropisme corécepteur de type VIH de base prédit la progression de la maladie

Contexte Tropisme du virus de l’immunodéficience humaine Le tropisme des corécepteurs VIH, la capacité du virus à entrer dans les cellules par CCR ou CXCR, est une caractéristique virale médiée par le gène de l’enveloppe L’impact du tropisme des corécepteurs sur l’histoire naturelle de l’infection n’a pas été complètement exploré Le tropisme des corécepteurs a été mesuré à l’aide d’un test de virus monoclonal recombinant sur des échantillons de plasma prélevés au départ chez des enfants et des adolescents de la cohorte de l’étude sur la croissance et le développement de l’hémophilie. associée à une numération lymphocytaire T CD inférieure et à un taux plasmatique d’ARN VIH plus élevé. En outre, elle prédisait indépendamment une plus grande diminution du nombre de lymphocytes T CD au cours du temps P & lt; Il a été démontré que le tropisme des corécepteurs, tel qu’évalué par ce test à cycle unique, influence indépendamment l’histoire naturelle de la maladie à VIH.

La progression clinique du VIH est prédite par le nombre de lymphocytes T CD, le taux d’ARN du VIH plasmatique , et une variété de facteurs hôtes [, -] En outre, la capacité du VIH à induire des syncytiums in vitro a été associée avec une diminution du nombre de lymphocytes T CD et avec la progression de la maladie, même si de nombreux individus progressent vers le SIDA sans virus détectable syncytium [, -] Nous reconnaissons maintenant que la formation de syncytia dans les cellules MT est généralement induite par les souches VIH qui utilisent le récepteur des chimiokines CXCR Malgré l’association bien établie entre la progression du VIH et de la maladie induisant le syncytium, il existe moins de données montrant que le tropisme du corécepteur CXCR ou le phénotype induisant le syncytium prédisent la progression de la maladie. niveau – ce dernier paramètre n’étant pas disponible au moment où de nombreuses études antérieures ont été réalisées. Il y a aussi un intérêt croissant à comprendre les implications du tropisme des corécepteurs à la lumière. f le développement de médicaments qui interagissent avec les récepteurs des chimiokines de manière à bloquer l’infection par le VIH Dans cette étude, nous utilisons un test d’enveloppe recombinante largement utilisé dans d’autres études de pathogenèse et pour le dépistage d’individus dans le CCR essais cliniques antagonistes pour décrire la prévalence du tropisme des corécepteurs et son association avec la progression du VIH

Méthodes

Population de patients

L’étude sur la croissance et le développement de l’hémophilie est une étude américaine multicentrique qui a inclus une cohorte de patients infectés par le VIH âgés de – ans, avec une durée moyenne de suivi des années . Chaque mois, des échantillons de sang ont été prélevés. Nombre de sous-populations de lymphocytes et cryoconservation d’échantillons plasmatiques Dans cette cohorte, les patients présentaient des données sur le tropisme des corécepteurs provenant d’échantillons de plasma prélevés au moment de l’inclusion. Traitement antirétroviral Le traitement antirétroviral a été administré aux participants pendant leur suivi, à leur discrétion. Les comités de sujets humains des établissements partenaires ont approuvé l’étude sur la croissance et le développement de l’hémophilie. Le consentement éclairé a été obtenu des parents ou des tuteurs légaux, et le consentement éclairé ou l’assentiment a été obtenu auprès de tous les participants, conformément aux sur les lignes directrices du Département américain de la santé et des services sociaux

Mesures du niveau d’ARN du VIH et du tropisme corécepteur

Le taux d’ARN du VIH a été mesuré dans un laboratoire central en utilisant le test d’ADN ramifié Versant HIV-RNA, la version, Bayer Healthcare et les échantillons de diagnostic qui avaient un niveau d’ARN VIH indétectable défini comme & lt; copies / mL ont été réanalysés en utilisant la version limite inférieure de détection au moment de l’analyse, des copies / mL échantillons de plasma avec un niveau d’ARN VIH ⩾ copies / mL ont été envoyés à Monogram Biosciences South San Francisco, CA pour l’analyse du tropisme corécepteur tropisme Les virus VIH pseudotypés ont été générés par cotransfection d’un vecteur génomique portant un gène rapporteur de la luciférase ainsi que des vecteurs d’expression contenant des gènes de l’enveloppe virale du patient amplifiés par RT-PCR à partir d’ARN du VIH plasmatique. les tests de tropisme, tels que ceux utilisant des cellules MT, l’amplification du plasma évalue le tropisme des corécepteurs sur les gènes circulants de l’enveloppe du VIH non cultivés et nonpassés présents dans l’échantillon. Le test détecte les virus utilisant CXCR et CCR, avec un tropisme corécepteur défini. par la capacité des virus recombinants à infecter des cellules U qui ont été modifiées pour exprimer CD et CCR ou CXCR-R tropique, CXCR-tropique, et d Aucune distinction n’est faite par ce test entre le tropisme mixte et le tropisme mixte lors du test des populations virales. L’infection de ces cellules cibles distinctes est définie par la luminescence, qui est quantifiée en tant que nombre. des unités de lumière relatives produites dans chaque type de cellule cible Le test de tropisme des corécepteurs a été effectué chez les patients de l’étude sur la croissance et le développement de l’hémophilie. Les données sur les taux d’ARN du VIH n’étaient pas disponibles. copies / mL n =, pour les patients n’ayant pas d’échantillons stockés adéquats n =, ou pour les cas pour lesquels nous n’avons pas pu amplifier le gène de l’enveloppe pour des raisons techniques indéfinies n = Le taux d’échec du test était légèrement supérieur à études utilisant ce test Les explications les plus probables à cela sont que les échantillons ont été congelés pendant ~ ans, et seulement des mL de plasma ont été envoyés pour test, alors qu’en pratique, mL de plasma est envoyé pour réanalyser en cas d’échec du dosage. ont été effectuées sur des échantillons aussi proches de la date d’inscription de référence que la disponibilité le permettait, avec% de données sur le tropisme du corécepteur obtenues à partir de spécimens collectés au cours des premiers mois après l’inscription.

Variables d’étude

La numération des lymphocytes T CD a été mesurée tous les mois, et les taux plasmatiques d’ARN VIH ont été mesurés chaque année. Les valeurs initiales pour chacun de ces paramètres représentent les valeurs au moment où le test de tropisme des corécepteurs a été effectué. Définition des centres de contrôle et de prévention des maladies Parmi les patients dont les données de tropisme de base des corécepteurs étaient disponibles, ils répondaient aux critères du SIDA avant l’inscription et n’étaient pas inclus dans les analyses de survie, et d’autres patients ont progressé vers le SIDA au cours des en haut

Analyses statistiques

Relation entre le tropisme des corécepteurs, le taux d’ARN du VIH et le nombre de CDT La relation entre les strates de lymphocytes T CD de base et le tropisme corécepteur a été évaluée par un test Cochran-Mantel-Haenzel Un Des modèles linéaires univariés ont été construits pour déterminer le tropisme des corécepteurs. prédire la numération des lymphocytes T CD et les taux plasmatiques d’ARN-VIH transformés mesurés en même temps La relation entre le tropisme des corécepteurs et les mesures longitudinales des lymphocytes T CD ont été modélisées L’analyse a utilisé un effet aléatoire, un modèle mixte, avec des effets aléatoires pour chaque Patients et divers effets fixes, y compris le tropisme des corécepteurs, le nombre de visites d’étude, l’utilisation de TAR, le nombre de lymphocytes T CD de base et le taux plasmatique d’ARN VIH, ainsi que les interactions de premier ordre avec le numéro de visite. Le nombre de lymphocytes T CD et les taux plasmatiques d’ARN du VIH pour chaque visite ont été jugés bons.Relations entre le tropisme des corécepteurs et la progression clinique Cox p modèles de risques roportionnels ont été adaptés au moment de modéliser la progression vers le SIDA clinique , contrôlant le nombre de lymphocytes T CD et le taux plasmatique d’ARN du VIH. Les analyses de Kaplan-Meier ont été tracées en fonction du temps écoulé jusqu’au SIDA. Virus utilisant CXCR

Résultats

Caractéristiques des participants Les caractéristiques de base des patients présentant des mesures de tropisme du corécepteur étaient similaires à celles de la cohorte globale, sauf que les patients ayant des mesures de tropisme du corécepteur présentaient un taux d’ARN du VIH plasmatique ± SD plus élevé ± copies / mL que ± copies / mL et Soixante-deux individus avec des données sur le tropisme des corécepteurs recevaient un TAR au moment de la collecte des échantillons, y compris une monothérapie avec de la zidovudine, de la didanosine, de la zalcitabine ou de la lamivudine. n = ou zidovudine plus didanosine n = Relation entre le tropisme des corécepteurs et la numération des CDT et le taux d’ARN du VIH plasmatique Soixante-quinze des échantillons pour lesquels il existait des mesures de tropisme du corécepteur avaient seulement un virus R détectable, tandis que les autres présentaient un tropisme à la fois CXCR et CCR, c’est-à-dire, virus DM; Résumé du tableau Au moment de l’évaluation du tropisme, les patients qui ne présentaient pas de virus CXCR-tropique détectable présentaient une CDT de référence plus élevée. comptages cellulaires que les individus avec le virus DM signifient le nombre initial de lymphocytes T CD ± SD, ± cellules / μL vs ± cellules / μL; P & lt; En accord avec cela, il y avait une relation entre les strates de numération des lymphocytes T CD de base et la présence ou l’absence de virus détectable utilisant CXCR P & lt; figure Le taux plasmatique initial d’ARN du VIH était plus bas chez les patients atteints du virus R que chez les patients ayant un taux plasmatique initial d’ARN du VIH de ± DM, ± copies log / ml vs ± copies log / mL; P & lt; En revanche, il n’y avait pas de différence statistiquement significative entre les groupes en ce qui concerne l’âge ou la durée estimée de l’infection

Tableau View largeTélécharger slideCaractéristiques des patients au moment du tropisme assessmentTable View largeTélécharger slideCaractéristiques des patients au moment de l’évaluation du tropisme

Vue de la figure grandDownload slideDistribution du tropisme des corécepteurs, par strate CD T de cellules T P & lt; Vue de la figure grandDownload slideDistribution du tropisme des corécepteurs, par strate CD T de cellules T P & lt; Figure Dans un modèle qui incluait le nombre de visites, l’utilisation de TAR, le tropisme des corécepteurs, le taux plasmatique initial d’ARN du VIH et le nombre de lymphocytes T CD, il y avait une analyse longitudinale qui évaluait la relation entre le tropisme des corécepteurs. une interaction entre la présence de virus DM et une plus grande diminution du nombre de cellules T CD au cours du temps P & lt;

Figure Vue largeTélécharger la diapositiveCodeled CD Nombre de lymphocytes T dans le temps sur la base du tropisme du corécepteur Le seul tropisme CCR est indiqué par la ligne continue, et le tropique double ou mixte, c.-à-tropique et CXCR-tropic est indiqué par la ligne pointillée P & lt; Figure Vue largeTélécharger la diapositiveCodeled CD Nombre de lymphocytes T dans le temps sur la base du tropisme du corécepteur Le seul tropisme CCR est indiqué par la ligne continue, et le tropique double ou mixte, c.-à-tropique et CXCR-tropic est indiqué par la ligne pointillée P & lt; Tropisme des corécepteurs et progression clinique Dans le modèle à risques proportionnels univariés de Cox, un virus DM détectable était associé à un taux de risque de progression vers le SIDA de% CI, -; P & lt; Le rapport de risque était% CI, -; P = après ajustement pour la numération des lymphocytes T CD et le taux plasmatique d’ARN du VIH Cette relation a été maintenue même lorsque l’utilisation du TAR à l’inclusion a été incluse dans ce rapport de risque; P = Cette observation est renforcée par le tracé de Kaplan-Meier sur la figure

Figure Vue largeTélécharger les courbesKaplan Meier courbes pour la progression clinique vers le SIDA P & lt; Le virus à tropisme CCR seul est désigné par la ligne continue, et le virus tropique double ou mixte, c’est-à-dire CCR-tropique et CXCR-tropique, est indiqué par la ligne en pointillésFigure View largeTélécharger les courbesKaplan Meier pour la progression clinique vers le SIDA P & lt; Le virus à tropisme CCR seulement est désigné par la ligne continue, et le virus tropique double ou mixte, c’est-à-dire le tropique CCR et le tropique CXCR, est indiqué par la ligne pointillée.

Discussion

Apparaît généralement dans un sous-groupe d’individus et typiquement après des années d’infection Plusieurs facteurs ont été suggérés pour prédisposer les sujets à l’émergence du virus utilisant CXCR, incluant la présence du polymorphisme du gène SDF et, dans un modèle animal, des réponses immunitaires cellulaires. Des recherches supplémentaires dans ce domaine pourraient fournir des informations supplémentaires sur les facteurs responsables de ce processus pathogène potentiellement important. Le développement récent d’antagonistes pharmacologiques du récepteur CCR a suscité un intérêt supplémentaire pour définir la prévalence, l’histoire naturelle et la pertinence de l’émergence de CXCR. Comme les antagonistes du RCC bloquent uniquement l’infection par le virus R, les individus ayant un virus CXCR détectable ont été systématiquement exclus de nombreux essais cliniques impliquant ces agents. Des études récemment publiées sur les antagonistes du RCC seuls et faisant partie d’une thérapie combinée ont montré une activité antivirale importante. patients qui n’avaient pas de virus CXCR détectable au bas Eline En revanche, la réponse virologique était minime chez ceux qui avaient le virus DM au moment de l’inscription Sur la base si ces résultats, il peut s’avérer important de définir le groupe de patients qui sont les plus susceptibles de répondre à Comme on l’a vu dans cette cohorte et dans d’autres études, une numération plus faible de lymphocytes T CD est un prédicteur important d’un virus induisant le syncytium ou d’un virus utilisant le CXCR. Néanmoins, aucune strate n’a été dépistée. Il est clair, cependant, que la probabilité qu’une personne ne possède pas de virus CXCR détectable – et qu’elle soit donc un candidat optimal pour le traitement par un antagoniste du CCR – est la plus forte chez les un plus grand nombre de cellules T CD En outre, les patients qui ont plus d’antirétroviraux ont tendance à avoir une fréquence plus élevée de virus CXCR détectable , même en présence de numérations de lymphocytes T CD Ces observations peuvent influencer les décisions Les antagonistes du CCR pourraient être utilisés au cours du traitement L’utilisation d’antagonistes du CCR soulève également des inquiétudes quant aux implications potentielles d’une percée virale survenant avec un virus utilisant CXCR ou l’enrichissement d’une population préexistante de virus utilisant CXCR détectable ou indétectable. Au début de l’étude Un essai clinique récent a montré que les patients atteints de DM, mesurés par le test utilisé dans la présente étude, ont été traités avec un antagoniste du RCC. Dans cette étude, un bénéfice virologique minimal a été observé; Cependant, il ne semble pas y avoir de conséquences négatives associées à cette stratégie sous forme de diminution du nombre de cellules T CD ou de progression clinique après des semaines de traitement Une limitation de notre étude est qu’elle définit les implications d’avoir détectable virus CXCR-using tel qu’évalué par un essai à cycle unique particulier Bien que les résultats puissent varier si d’autres évaluations phénotypiques ou génotypiques ont été utilisées, la présente étude est cohérente avec d’autres et utilise un test qui est largement utilisé Une autre limitation de cette étude est qu’elle se concentre sur la prédiction On sait qu’il existe des individus qui ont un virus CXCR détectable de façon intermittente, ce qui peut être associé à la sensibilité du test, et que le virus utilisant le CXCR peut émerger au fil du temps ne peut exclure la possibilité que cette variation puisse influencer le résultat, les données démontrent un impact hautement significatif d’un tropisme de corécepteur unique a évaluation La présente étude doit également être évaluée dans le contexte d’une population d’étude qui a été minime- ment affectée par le TAR, ce qui pourrait influencer la prévalence du virus CXCR détectable et sa pertinence clinique Enfin, d’autres facteurs peuvent influencer les résultats. Récemment, dans la même cohorte, la capacité de réplication des polysaccharides est associée à une diminution de la numération lymphocytaire CD et à une progression de la maladie Néanmoins, la relation entre le tropisme et la numération des lymphocytes T diminue et la progression de la maladie reste importante. Cette étude prolonge les travaux antérieurs en montrant que la relation entre le tropisme des corécepteurs et la progression de la maladie est vraie, même en utilisant le test de recombinaison de virus qui est maintenant largement utilisé dans les essais cliniques des antagonistes du RCC, ainsi que après contrôle des autres variables qui n’ont pas été incluses dans les études précédentes, telles que l’ARN du VIH plasmatique niveau [,,] Ces résultats appuient fortement la nécessité de poursuivre l’étude des facteurs associés à l’émergence du virus CXCR-tropique, ainsi que la relation entre cet événement et la progression de la maladie. modifier l’histoire naturelle de la maladie fera progresser notre compréhension de l’immunopathogenèse du VIH et améliorera notre capacité à traiter les personnes infectées

Membres de l’étude sur la croissance et le développement de l’hémophilie

Les personnes suivantes sont les directeurs de centre, les coordinateurs d’étude ou les présidents des comités de l’étude: Dr E Gomperts, Dr W Y Wong, Dr F Kaufman, Dr M Nelson et S Pearson Children’s Hospital Los Angeles, Los Angeles, CA; Le Dr M Hilgartner, le Dr S Cunningham-Rundles et le Dr I Goldberg du New York Hospital-Cornell Medical Center, New York; Le Dr WK Hoots, le Dr K Loveland et l’école de médecine M Cantini de l’Université du Texas à Houston; Dr A Willoughby et Dr Robert Nugent Les Instituts nationaux de la santé, Institut national de la santé de l’enfant et du développement humain, Bethesda, MD; Dr S. Donfield Rho, Chapel Hill, Caroline du Nord; Dr C. Contant, Jr. Baylor College of Medicine, Houston, TX; Le Dr C T Kisker, le Dr J Stehbens, l’Hôpital S O’Conner et l’Hôpital et Cliniques de l’Université J McKillip de l’Iowa, Iowa City; Dr P Sirois Université de Tulane, Nouvelle-Orléans, LA; Le Dr C Sexauer, le Dr H Huszti et l’Hôpital F Kiplinger pour enfants d’Oklahoma, Oklahoma City; S Hawk, Dr S Arkin, et le Dr A Forster Mount Sinai Centre Médical, New York, NY; Dr S Swindells et S Richard Université du Nebraska Medical Center, Omaha; Le Dr J Mangos et le Centre des sciences de la santé de l’Université Davis du Texas à San Antonio; Le Dr J Lusher, le Dr I Warrier et l’Hôpital pour enfants K Baird-Cox du Michigan, Detroit; Dr M E Eyster, Dr D Ungar, et S Neagley Milton S Hershey Medical Center, Hershey, PA; Dr A Shapiro et J Morris Indiana Centre de l’hémophilie et de la thrombose, Indianapolis; Dr G Davignon et P Mollen Université de Californie-San Diego Medical Center, San Diego; et le Dr B Wicklund et l’école de médecine A Mehrhof Kansas City, hôpital pour enfants Mercy, Kansas City, MO

Remerciements

Nous remercions les enfants, les adolescents et les parents qui se sont portés volontaires pour participer à cette étude; les membres des centres de traitement de l’hémophilie; Mary McNally Science Applications International; National Cancer Institute-Frederick, pour la gestion et l’expédition de tous les échantillons cliniques pour cette étude; Signe Fransen et Jonathan Toma Monogram Biosciences, pour effectuer des dosages de tropisme des corécepteurs; et Bayer Healthcare and Diagnostics, pour effectuer des mesures d’ARN-VIH. Soutien financier National Institutes of Health NIH; HD, AI et AI et le Programme de recherche sur le SIDA de l’université CCTG-CH-SD– Le développement du test de tropisme corécepteur de l’enveloppe a été soutenu en partie par de petites entreprises, des subventions de recherche innovantes de l’Institut national des allergies et des maladies infectieuses. R A Conflits d’intérêts potentiels ESD a agi comme investigateur, consultant et conseiller pour Monogram Biosciences; CJP, WH, MB et EPC sont des employés de Monogram Biosciences Tous les autres auteurs: no conflicts